| Bindung von Hepatitis C Virus-ähnlichen Partikeln an Zielzellen : ein Modell zur funktionellen Untersuchung von antiviralen Antikörpern (2005). Binding of hepatitis C virus-like particles to target cells as a model for the study of antiviral antibodies | |||||||||||||||
Abstract | |||||||||||||||
| Das HCV gehört zu den weltweit wichtigsten Erregern der Hepatitis. Die Mehrzahl der HCV-infizierten Patienten erkrankt an einer chronischen Hepatitis, die zur Leberzirrhose und zum HCC fortschreiten kann. Die Bedeutung von Virus-neutralisierenden Antikörpern für die Viruselimination ist durch das Fehlen von effizienten Modellsystemen zur Virusneutralisation nur unvollständig verstanden. Wir haben kürzlich gezeigt, dass die Expression der HCV-Strukturproteine in Insektenzellen zu HCV-ähnlichen Partikeln (HCV-like particles; HCV-LPs) führt, die ähnliche Eigenschaften wie das HCV haben. HCV-LPs binden spezifisch an definierte Zielzellinien und werden von ihnen aufgenommen. Um ein Modell zur Charakterisierung von Antikörper-vermittelter Virusneutralisation zu entwickeln, wurde untersucht, ob die zelluläre HCV-LP-Bindung durch antivirale Antikörper aus Seren von HCV-Patienten mit akuter symptomatischer Hepatitis C hemmbar ist (8 Patienten mit akuter Hepatitis und Viruselimination sowie 13 Patienten mit akuter Hepatitis und chronischem Verlauf). Nach Präinkubation der Partikel mit antiviralen Antikörpern bzw. Serum erfolgte die Untersuchung der HCV-LP-Bindung an die humane Hepatomzellinie Huh-7 mittels Durchflußzytometrie. HCV-LPs der Genotypen 1a und 1b zeigten ein konzentrations-abhängiges und sättigbares Bindungsprofil und wurden temperaturabhängig von Huh-7-Hepatomzellen internalisiert. Bei 13 von 21 Patienten mit akuter symptomatischer Hepatitis C wurde eine konzentrationsabhängige Hemmung der HCV-LP-Bindung durch Anti-HCV-Antikörper beobachtet. Interessanterweise zeigten 4 der 13 Patienten mit HCV-LP-Bindungshemmung eine Genotyp-übergreifende Hemmung der HCV-LP-Bindung (Kreuzneutralisierung). Die erfolgreiche Viruselimination im Patienten korrelierte jedoch nicht mit dem Vorhandensein von Bindungs-neutralisierenden Antikörpern. Die Kartierung der von den Antikörpern erkannten Hüllproteinepitope identifizierte ein Epitop in der N-terminalen Region des Hüllglykoproteins E2 (SQKIQLVNTNGSWHI, aa Position 408-422) als Ziel von Bindungs-neutralisierenden Antikörpern. Die Antikörper-vermittelte Bindungsneutralisation von HCV-LPs an Zielzellen stellt ein neues Modell zur funktionellen Charakterisierung von Anti-HCV-Antikörpern dar. Unsere Untersuchungen weisen darauf hin, dass im Verlauf der akuten Hepatitis C Virus-neutralisierende Antikörper induziert werden, die jedoch in der Mehrzahl der Infizierten eine Viruspersistenz nicht verhindern können.. Hepatitis C virus (HCV) is a leading cause of chronic viral hepatitis worldwide. The study of antibody-mediated virus neutralization has been hampered by the lack of an efficient and high-throughput cell culture system for the study of virus neutralization. The HCV structural proteins have been shown to assemble into non-infectious HCV-like particles (HCV-LPs). Similar to serum-derived virions, HCV-LPs bind and enter human hepatocytes and hepatoma cell lines. In this study, we developed an HCV-LP based model system for a systematic functional analysis of antiviral antibodies from patients with acute or chronic hepatitis C. We demonstrate that cellular HCV-LP binding was specifically inhibited by antiviral antibodies from patients with acute or chronic hepatitis C in a dose-dependent manner. Using a library of overlapping envelope peptides we identified an epitope in the N-terminal E2 region (SQKIQLVNTNGSWHI, amino acid position 408-422) as one target of human antiviral antibodies inhibiting cellular particle binding. Using a large panel of serum samples from patients with acute and chronic hepatitis C, we demonstrate that the presence of antibodies with inhibition of binding activity was not associated with viral clearance. In conclusion, antibody-mediated inhibition of cellular HCV-LP binding represents a convenient system for the functional characterization of human anti-HCV antibodies allowing the mapping of envelope neutralization epitopes targeted by naturally occurring antiviral antibodies. | |||||||||||||||
Publication details | |||||||||||||||
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Cited publications (30) | |||||||||||||||